多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）是通过免疫动物使用包含多种抗原决定簇的抗原制备而成的。这一过程能够刺激多个B细胞克隆，从而产生针对多个抗原表位的不同抗体。最终获得的免疫血清实际上是一种包含多种抗体的混合物，即多克隆抗体。与之相对的是单克隆抗体，它由单一B细胞克隆产生，具有高度的均一性，并且仅针对特定的抗原表位。单克隆抗体通常通过杂交瘤技术进行制备，这种技术将具有特异性抗体分泌能力的致敏B细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。

单克隆抗体与多克隆抗体的优缺点

多克隆抗体的优点

• 有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。
• 能够识别多个表位。
• 对抗原中的微小变化具有更高的容忍度。
• 能够识别与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质，或从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白。
• 通常是检测变性蛋白质的首选。
• 多表位提供更强的检测效果。

多克隆抗体的缺点

• 容易产生批次间差异。
• 可能产生大量非特异性抗体，有时会导致背景信号。
• 不适合探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常可识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

• 杂交瘤一旦建立便成为恒定的再生源，所有批次均相同。
• 切片和细胞染色造成的背景较低。
• 具有良好的特异性，适合用于一抗的分析测定或组织中的抗原检测，背景染色显著低。
• 同质性非常高。
• 单克隆抗体的特异性使其能有效结合混合物中的抗原。

单克隆抗体的缺点

• 能够产生大量特异性抗体，但可能特异性过强。
• 经过抗原化学处理后，较多克隆抗体更易于丢失表位，但可通过使用多个单克隆抗体进行补偿。

抗体选择的考虑因素

当需要高特异性的抗体、用量较大或需长期一致使用，且应用要求多样（如WB/IP/IF/ICC等），推荐使用单克隆抗体。相对而言，多克隆抗体的特异性较弱，即便使用相同抗原制备，不同批次间也可能存在差异，从而在特异性和一致性方面有局限性。在免疫检测中，使用多克隆抗体时更容易产生背景，如在WB中出现杂带、在IHC中背景较深等。然而，由于多克隆抗体能够识别多个抗原表位，即使少数抗原表位被破坏或抗原构象发生改变，实验结果仍不容易受到影响。此外，若免疫原的制备较困难，建议选用单克隆抗体。

若抗体特异性要求不高，且需要进行沉淀和凝集反应的检测或仅需进行ELISA实验，可选择制备多克隆抗体。多克隆抗体在制备时间上较短，首次制备的成本低，在某些情况下仍然是可行选项。同时，在相同条件下，多克隆抗体的使用也能提高检测灵敏度，尤其是对丰度较低的蛋白更容易检出。

抗原选择的原则

抗原的选择可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白或多肽。抗原质量越高，最终获得高质量抗体的概率也越大。目前，抗体制备常采用重组蛋白或多肽作为抗原。常规情况下，重组蛋白作为抗原往往含有更多的抗原决定簇，兼具空间表位和线性序列表位，免疫刺激相对充分，因此最终获取应用面较广的抗体几率大幅提升。特别是在目标蛋白已知具有修饰或复杂结构时，优先选择重组蛋白。

当然，在某些情况下必须使用多肽，例如在对同源家族某一特定蛋白抗体的制备中，需要找到特异性氨基酸合成多肽，或针对一些修饰化抗体，在多肽合成阶段对某些氨基酸进行定点修饰来制备特定抗体。

抗原多肽选择的一般基本原则包括：

• 尽量选择位于蛋白质表面的肽段。
• 保证所选序列不形成α-helix。
• N端和C端的肽段相较于中间的肽段表现更佳。
• 避免选择蛋白内部重复或接近重复的序列。
• 避免同源性过高的肽段。
• 交联可在N端和C端进行，选择不影响抗体产生的端。
• 序列中不宜含有过多的脯氨酸，但适量的脯氨酸有助于肽链结构相对稳定，有利于产生特异性抗体。

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