走进尊龙凯时

NEWS

单多克隆抗体与抗原选择策略 – 尊龙凯时助力生物医疗创新

来源:卫雁聪 日期:2025-03-18

多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb)是通过免疫动物使用包含多种抗原决定簇的抗原制备而成的。这一过程能够刺激多个B细胞克隆,从而产生针对多个抗原表位的不同抗体。最终获得的免疫血清实际上是一种包含多种抗体的混合物,即多克隆抗体。与之相对的是单克隆抗体,它由单一B细胞克隆产生,具有高度的均一性,并且仅针对特定的抗原表位。单克隆抗体通常通过杂交瘤技术进行制备,这种技术将具有特异性抗体分泌能力的致敏B细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合,形成B细胞杂交瘤。

单多克隆抗体与抗原选择策略 – 尊龙凯时助力生物医疗创新

单克隆抗体与多克隆抗体的优缺点

多克隆抗体的优点

  • 有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。
  • 能够识别多个表位。
  • 对抗原中的微小变化具有更高的容忍度。
  • 能够识别与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质,或从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白。
  • 通常是检测变性蛋白质的首选。
  • 多表位提供更强的检测效果。

多克隆抗体的缺点

  • 容易产生批次间差异。
  • 可能产生大量非特异性抗体,有时会导致背景信号。
  • 不适合探测抗原的特定结构域,因为抗血清通常可识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

  • 杂交瘤一旦建立便成为恒定的再生源,所有批次均相同。
  • 切片和细胞染色造成的背景较低。
  • 具有良好的特异性,适合用于一抗的分析测定或组织中的抗原检测,背景染色显著低。
  • 同质性非常高。
  • 单克隆抗体的特异性使其能有效结合混合物中的抗原。

单克隆抗体的缺点

  • 能够产生大量特异性抗体,但可能特异性过强。
  • 经过抗原化学处理后,较多克隆抗体更易于丢失表位,但可通过使用多个单克隆抗体进行补偿。

抗体选择的考虑因素

当需要高特异性的抗体、用量较大或需长期一致使用,且应用要求多样(如WB/IP/IF/ICC等),推荐使用单克隆抗体。相对而言,多克隆抗体的特异性较弱,即便使用相同抗原制备,不同批次间也可能存在差异,从而在特异性和一致性方面有局限性。在免疫检测中,使用多克隆抗体时更容易产生背景,如在WB中出现杂带、在IHC中背景较深等。然而,由于多克隆抗体能够识别多个抗原表位,即使少数抗原表位被破坏或抗原构象发生改变,实验结果仍不容易受到影响。此外,若免疫原的制备较困难,建议选用单克隆抗体。

若抗体特异性要求不高,且需要进行沉淀和凝集反应的检测或仅需进行ELISA实验,可选择制备多克隆抗体。多克隆抗体在制备时间上较短,首次制备的成本低,在某些情况下仍然是可行选项。同时,在相同条件下,多克隆抗体的使用也能提高检测灵敏度,尤其是对丰度较低的蛋白更容易检出。

抗原选择的原则

抗原的选择可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白或多肽。抗原质量越高,最终获得高质量抗体的概率也越大。目前,抗体制备常采用重组蛋白或多肽作为抗原。常规情况下,重组蛋白作为抗原往往含有更多的抗原决定簇,兼具空间表位和线性序列表位,免疫刺激相对充分,因此最终获取应用面较广的抗体几率大幅提升。特别是在目标蛋白已知具有修饰或复杂结构时,优先选择重组蛋白。

当然,在某些情况下必须使用多肽,例如在对同源家族某一特定蛋白抗体的制备中,需要找到特异性氨基酸合成多肽,或针对一些修饰化抗体,在多肽合成阶段对某些氨基酸进行定点修饰来制备特定抗体。

抗原多肽选择的一般基本原则包括:

  • 尽量选择位于蛋白质表面的肽段。
  • 保证所选序列不形成α-helix。
  • N端和C端的肽段相较于中间的肽段表现更佳。
  • 避免选择蛋白内部重复或接近重复的序列。
  • 避免同源性过高的肽段。
  • 交联可在N端和C端进行,选择不影响抗体产生的端。
  • 序列中不宜含有过多的脯氨酸,但适量的脯氨酸有助于肽链结构相对稳定,有利于产生特异性抗体。

在生物医疗领域,选择准确的抗体和抗原是确保实验成功和数据可靠的关键。尊龙凯时致力于提供高质量的抗体产品和专业的技术支持,帮助科研人员在各自的研究领域取得更大成就。

上一篇:尊龙凯时推出超低dsRNAT7 RNA聚合酶,开启mRNA合成新纪元下一篇:尊龙凯时MAPK检测试剂盒操作注意事项

全国客户服务热线
15992549490 总部地址:海口高港区白街道79号

欢迎关注尊龙凯时官方微信或拨打客服电话详询!

  

尊龙凯时官方微信